随着寄生虫学家对寄生虫形态、结构等特性的研究，寄生虫免疫学开始被揭示。目前使用的寄生虫疫苗主要是活疫苗或减毒疫苗，是劳动密集型产品，主要针对原生动物，包括球虫、弓形虫、新孢子虫、巴贝虫、梨状虫和贾第虫，而针对线虫的疫苗，绦虫和体外寄生虫相对较少（

寄生虫疫苗不如细菌和病毒疫苗容易研制，主要原因是寄生虫是真核生物，多为多细胞动物，生活史复杂。虽然寄生虫的体外培养已经取得了一些成果，但绝大多数的p在人工条件下，花生四烯酸不能离开寄主培养；寄生虫抗原复杂，易变异，易伪装，表面抗原脱落和更新，根据兽用寄生虫疫苗的种类，对已研制成功和正在研制的疫苗的研究进展和应用情况作了如下介绍（

（1）疫苗

（1）减毒疫苗

目前使用的减毒活疫苗具有绝对优势，其保护机制主要是模仿自然感染，刺激机体产生免疫应答。然而，活疫苗也存在许多问题：

安全性h活疫苗能产生一定的免疫保护作用，它仍然是一种活的蠕虫，在某些情况下可能引起疾病（

免疫保护作用是不同的：有些寄生虫能感染多种动物，它们的疫苗往往对一种动物有较好的保护作用，但对另一种动物的保护作用较差，或对不同年龄动物的保护效果不一致（

经济效益：由于上述问题，有些疫苗虽然具有良好的免疫保护作用，但与广谱抗寄生虫药（

相比，生产成本高，免疫方法复杂，保护范围窄，减毒寄生虫疫苗的使用受到一定的限制。在s同时，也促使相关人员研究开发新的疫苗（寄生虫分泌或代谢产物

具有很强的抗原性）。制备分泌性抗原疫苗的一种方法是在培养技术成功的前提下，从培养基中提取有效抗原作为制备疫苗的组分，最成功的例子是牛巴贝斯虫疫苗和犬巴贝斯虫疫苗，分别在澳大利亚和欧洲得到广泛应用。这种疫苗实际上是一种混合疫苗，包括许多成分。在应用中往往需要辅助剂和多次接种，对其初步技术条件（病原菌培养）要求较高但是，这需要一定的资金投入，所以成本有时是不容易被接受的。另一种制备分泌性抗原疫苗的方法是直接从患病动物中提取抗原。例如，从感染牛血清中提取的抗原可用于免疫其他易感牛（

（III）基因工程疫苗

在抗寄生虫感染方面，DNA疫苗的研究已得到积极探索。日本在华支睾吸虫、绦虫、疟原虫、利什曼原虫、隐孢子虫、弓形虫、锥虫、球虫病等疾病的DNA疫苗研究方面取得了良好的进展，其中疟疾DNA疫苗已获批准生产血吸虫重组基因工程疫苗是

基因工程疫苗在寄生虫中成功的例子。以重组GST（glutathiones-transferase）为代表的基因工程疫苗已在动物和人身上进行了实验，其保护效果达50%以上。该蛋白在日本血吸虫各发育阶段（包括卵期）均有表达。此外，该抗原在E。大肠杆菌，纯化方法非常简单（

2.正在研制的疫苗

（1）疟原虫疫苗

疟疾疫苗的研制是疟疾防治的重要内容。从20世纪70年代的全虫活疫苗到基因工程ubunit疫苗（如MSP1、emp1等）和化学合成肽疫苗（如SPf66）在20世纪80年代由于免疫应答低、临床试验效果差而没有得到广泛的应用

，20世纪90年代核酸疫苗因其突出的优点引起了研究者的极大兴趣。Sedegah等（1994）将约氏疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因真核表达质粒肌肉注射到小鼠体内，可产生特异性抗环子孢子蛋白抗体和CTL反应，均高于减毒子孢子免疫小鼠。肝原虫DNA疫苗× 在105个子孢子的攻击下，感染负荷降低了86%接种DNA疫苗2～3次，用102个子孢子攻毒。结果表明，该疫苗对68%的小鼠有保护作用，说明DNA疫苗可用于抗疟

感染，目前用于疟原虫核酸疫苗研究的保护性抗原基因主要有CSP、msa1、MSA2、SSP2、hep17、Exp1和RESA。1997年，Butler等人在nature上进行了一项临床试验，用qs21试剂作为佐剂，接种含有环孢疟原虫蛋白基因的核酸疫苗。结果，7名志愿者中有6人被感染疟原虫的蚊子反复叮咬后得到保护。本实验为ap提供了宝贵的经验寄生虫核酸疫苗在人体内的复制（不同种类和亚种的利什曼病）引起不同类型的利什曼病，具有不同的流行病学特征。利什曼病疫苗分为组分抗原、基因转化无毒活菌、合成重组抗原、表达利什曼病抗原的重组细菌/病毒和DNA疫苗，其中大部分处于临床前阶段（

，在gp63、lack抗原、PSA-2等分子疫苗候选抗原的研究方面也取得了很大进展，其中gp63的研究已较为广泛和深入。Gp63是研究最深入的胞外酶，也被称为主要的表面抗原前鞭毛体表面蛋白酶（PSP）约占前鞭毛体蛋白

的1%，用这些抗原和佐剂免疫可对实验动物产生明显的保护作用，但这些佐剂可能不适合人类使用；用卡介苗、沙门氏菌、大豆苗病毒等感染载体构建表达黎曼表面抗原gp63的重组卡介苗，并证明其对小鼠具有保护性免疫作用。Gp63基因在减毒鼠伤寒沙门氏菌中也有表达，并通过口服途径免疫小鼠。Xu等用编码利什曼原虫gp63基因的DNA疫苗pcdna1-gp63直接免疫BALB/c小鼠，并第40天检测到质粒至少有两个拷贝，免疫组化染色检测到高水平的gp63。利什曼原虫挑战感染，发现小鼠已经产生了高度的耐药性。利什曼原虫抗原能诱导免疫小鼠产生高水平的细胞因子，抵抗Th1细胞的攻击。BALB/c小鼠对利什曼原虫感染普遍敏感，因为除非加入外源性IL-12，否则不能激活Th1反应。刘泉等（2003）也证明了缺失抗原基因能诱导小鼠对利什曼原虫的保护性免疫（

（3）胃肠道线虫疫苗

以线虫、食道口线虫和颊口线虫最为敏感牛羊消化道线虫病分布广泛，危害最大。目前，芬苯达唑和阿维菌素主要用于治疗，在疫苗研究方面也有许多成功的报道。Munn等人（1987）发现，用肠微绒毛表面的扭体蛋白免疫绵羊后，扭体血矛线虫的感染率降低了78%。此后，肠道相关抗原的研究成为吸血线虫和其他吸血寄生虫研究的热点（

H11是一种具有氨肽酶a和m活性的110kda膜内蛋白。它与血液的消化有关。与抗体结合后，会破坏消化功能保护率与抗体滴度呈正相关。然而，在自然感染的情况下，它没有免疫原性，可能是一种隐藏的抗原。H11疫苗的免疫效果相当令人满意。免疫绵羊的保护率可达90%以上，保护期可达23周以上，不影响自然免疫。母亲也可以通过胎盘将抗体传递给胎儿。扭体血矛线虫的其他肠道相关抗原也能诱导绵羊产生高水平的免疫保护作用，如H-gal-GP和tbsp。目前，国外对HL、H-gal-GP和tbsp重组疫苗的研究进展很快（但所有疫苗的抗原表位均为阴性）上述分子含有复杂的糖组分，在传统的表达载体中难以正确表达。油菜、酵母和病毒）。因此，Redmond等人（2001）开始在线虫体内体外表达这些抗原，如秀丽隐杆线虫和线虫，它们能在体外繁殖并自由生活，取得了可喜的进展（

（IV）在血吸虫病方面，发现了一些具有一定免疫保护作用的抗原，如副肌球蛋白（RSJ 97），GST、FABP、膜蛋白（Sj23）、卵黄铁蛋白（ferl）、抗凋亡因子（dadl）等

携带日本血吸虫副肌球蛋白、26kda和28kda谷胱甘肽S-转移酶、钙网蛋白、磷酸三糖d小鼠肌肉注射e-羟化酶、22.6kda膜蛋白和14kda脂肪酸结合蛋白基因（这6种蛋白目前被认为是有前途的血吸虫疫苗候选蛋白），但只有副肌球蛋白核酸疫苗能诱导小鼠产生特异性抗体。但Kayes等人用曼氏血吸虫28kda-GST核酸疫苗免疫小鼠，检测到血清中特异性抗GST-IgG抗体。李传明等在国内的实验结果也表明，用日本血吸虫26kDa gst dna疫苗免疫小鼠，可诱导一定水平的抗血吸虫抗体，用26kDa gst dna疫苗免疫小鼠，可形成一定的保护性免疫组化统一防治日本血吸虫尾蚴感染；同时可以减轻血吸虫虫卵对肝组织的病理损害（

（V）囊虫病和包虫病疫苗

囊虫病和包虫病是发展中国家的主要人畜共患病，危害十分严重。包虫病疫苗Eg95对牛的保护率可达96%～100%，澳大利亚、新西兰、阿根廷和我国已证实。牛带绦虫45W疫苗对绵羊的保护率可达92%以上，对牛带绦虫也有较高的保护率（

Eg95、45W等结构相似的抗原在牛带绦虫中诱导表达E。大肠杆菌，表现出种间交叉保护。如牛带绦虫45W、～18和～16抗原的混合物对牛带绦虫有保护作用（93%）。其他抗原，如fABP也可以作为疫苗候选抗原。Chabalgoity等人（2001年）以减毒沙门氏菌为受体表达抗原。犬经口免疫后，发现该抗原能诱导相应的体液免疫和细胞免疫应答（

李文贵等（2008）用重组多房棘球绦虫bcg-em14-3-3疫苗分别经皮下注射和鼻腔注射免疫BALB/c小鼠。免疫8周后，用原头节攻击BALB/c小鼠观察小鼠脾细胞因子的变化。结果表明，重组多房棘球绦虫bcg-em14-3-3疫苗能诱导小鼠产生Th1型反应，从而对抗EM原头节攻击感染（

（VI）微小隐孢子虫疫苗

何红萱等插入编码C。将细小病毒子孢子导入真核表达载体pcr3.1（+）中，构建重组质粒pcr3.1-15，经鼻粘膜免疫孕山羊。结果表明，免疫后的山羊血浆和初乳中均存在抗cp15抗体。pcr3.1-15经鼻腔免疫孕山羊的免疫效果可以传染给后代，从而保护后代免受C。细小病毒感染。他们用含c的重组质粒pcdna3-15/60进一步免疫BALB/c小鼠。经鼻粘膜接种微小隐孢子虫表面蛋白CP15/60基因，经口接种微小隐孢子虫卵囊。发现该质粒可诱导系统和粘膜免疫应答（

（VII）弓形虫DNA疫苗

MeV elec等研究发现，用表达两种弓形虫抗原SAG1和GRA4的质粒分别免疫C57BL/6小鼠。小鼠存活率为62%。共表达质粒免疫后存活率为75%。注射可获得87%的存活率同时应用粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）。韩粤东等用携带弓形虫Pop2基因的质粒DNA免疫小鼠，发现该疫苗能产生强烈的细胞和体液反应，延长小鼠存活时间，延缓死亡开始。弓形虫核仁团酸疫苗候选基因包括：表面蛋白P30基因和P22基因。杆状蛋白基因rop1基因、r0p2基因；Gra基因等（

（8）外寄生虫疫苗

苍蝇、虱子、螨虫、蜱等外寄生虫严重危害牛羊的健康，即澳大利亚生物技术公司和CSIRO（f联邦科学和工业研究组织），商品名为tick gard。目前，biotec公司已生产出免疫效果更强的第二代蜱虫gard plus疫苗，该疫苗已获准在加拿大生产。同样，由毕赤酵母表达的gavac疫苗由heberbiotec公司生产。抗乙型肝炎皮下毒素A的重组疫苗。牛黄在实验中也取得了成功，它已被加拿大阿尔伯塔省批准作为一种商业疫苗销售。除上述三种疫苗外，其他体外寄生虫如皮蝇、蛙虱、东方血蝇等也在研制中（各学科发展迅速，相互渗透，特别是现代生物技术的迅速发展，为寄生虫病免疫学的研究提供了强有力的工具。如何快速有效地发现保护性抗原或表位一直是抗寄生虫分子疫苗研究的热点。基于寄生虫自身的生物学和免疫学特性及其与宿主的相互作用，通过实验技术鉴定疫苗候选分子一直是最基本的方法（然而，随着寄生虫功能基因组学的发展，积累了大量的分子序列数据，可以进一步开发利用。因此，近年来发展起来的反向疫苗学方法，即预测和分析利用免疫信息学原理获得se序列，结合实验鉴定获得疫苗候选分子或表位，有望加快寄生虫分子疫苗

的研制进程，除了个别研究小组在筛选恶性疟原虫保护性抗原表位的总体策略中采用的反向疫苗方案外，还有一些研究将理论预测与实验鉴定相结合，基本上是已知候选疫苗分子Th细胞表位的作图，这些都为理论预测结合实验鉴定技术到disc积累了基础数据过度保护的表位。如果能合理利用，使其更好地为寄生虫疫苗的研发服务，将成为今后广大科研人员的研究热点和重点（作者：王军（1982-），男，助理兽医，本科学历，主要从事动物疾病的诊断和预防。电子邮件：wjrz520@sina.com 电话：13909987069 0998-6186379

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