目前，冷冻精液已在世界范围内广泛应用于牛的人工授精。因此，人工授精中的精液质量检查主要是指人工授精前后解冻精液的检查。国内外对公牛冷冻精液有严格的质量标准。用户质量检查的主要目的是进一步验证质量，找出操作中存在的问题（安瓿中封装的稀释剂（通常为2.9%柠檬酸钠1ml）在40℃下放入温水中℃. 当温度接近40度时℃, 打开安瓿，放入一个冷冻精液，轻轻摇动使其融化，然后取样本在高倍显微镜下观察活力。T显微镜台的温度应保持在37℃左右℃. 在评估精子活力时，要注意上、中、下三个层次精子活力的变化，以及左右、上、下四个层次的视力差异，以便做出更准确的判断。当精子活力大于0.3（

（2）时，即可获得合格的精液。冷冻精液可直接放入40℃冷冻精液中℃ 温水。熔化后立即取出，切断棉塞一端，取样品进行检验（

2.检查死精子和活精子

的比例先将死精子和活精子染色液装入手指形玻璃管容量约0.5ml，染色液为伊红。将苯胺黑溶液（含5%水溶性曙红和1%苯胺黑溶液）放入37℃ 染色前预热的培养箱或水浴箱。滴入2-3滴解冻精液。混合后，放入培养箱。3分钟后，风干后在油镜下观察涂片。死精子是红色的，活精子没有染色，或者只有头部核环的浅红色。随机观察200个精子，计算死精子与活精子的比值。用这种方法获得的活精子百分率高于精子。对于精子活力的观察，熟练掌握而准确估计人员可不做精子活力染色检查（

3.密度试验

精子密度试验最简单的方法是取一滴解冻的精液，在低倍显微镜下凭经验粗略估计其密度是否符合授精要求。更准确的方法是使用血细胞计数装置，具体方法这里不介绍。基于此，光电比色法测定精液中精子密度已在大型公牛站得到广泛应用。通过密度试验计算每毫升精液中精子的数量，然后计算每毫升精液中精子的有效数量（即每毫升精液中精子的有效数量）e精子直线运动的数量）可根据解冻后的存活率得出，最后乘以授精剂量（颗粒冷冻精液为0.1%）± 01毫升；5ml或0.25ml）计算每一次授精剂量的有效精子数；在细管

4中冷冻精液1000多万份，其他检查包括异常精子比例、顶体完整率和存活指数。它不是在正常生产条件下进行的。只有当奶牛受精后受胎率明显下降，且难以找到确切原因时，才能送有关实验室对这些项目进行检查。第三节牛精液的冷冻保存到目前为止，在各类家畜中，牛精液冷冻保存技术最为成功，已形成了一套完整的工艺流程（牛冷冻精液的稀释液有多种，并可根据自己的经验和条件选择和固定一种或两种最合适的稀释剂（

（2）稀释剂配制原则：首先，所有配制稀释剂的器具必须仔细清洗，严格消毒。第二，稀释液应现场使用和配制，并保持新鲜。密封灭菌后的稀释液允许在0-5℃冰箱中存放℃ 一个星期。然而，卵黄、抗生素、酶和激素等生物活性物质必须使用前临时添加。第三，稀释水应为蒸馏水或再蒸馏水，应为新鲜中性水。第四，配制稀释剂所用的化学制剂应是纯的，一般要求化学纯度或分析纯度；称重应准确，并在充分溶解和过滤（煮沸或蒸汽消毒）后消毒。第五，蛋黄和牛奶成分应新鲜、无污染、无杂质。第六，稀释液冷却至室温时必须加入抗生素等生物活性物质，以免失去其生物活性（2）原始精液的稀释倍数主要由精液的精子密度和活力决定以及解冻精子的活力。虽然没有具体的规定，但必须确保每一剂量精液授精所含有效精子（精子直线运动）的数量达到规定标准。比如上世纪60年代，国外冷冻精液稀释率只有英国的50倍左右，爱尔兰的10倍，法国的9-23倍，前苏联的10-25倍，美国的30-50倍，保证了每一次授精的1500万个有效精子。目前，在我国冷冻精液生产中，由于颗粒体积减小，解冻后再稀释，原精液一般稀释1:2-4倍。当t喂，每毫升解冻液中加一粒，这是一剂人工授精。有效精子不少于1000万个，可获得理想的受孕效果。实际上，最终稀释约为30倍（

（2）稀释法甘油是牛精液冷冻保存的重要保护剂，但对精子也有保护作用。为了减少甘油对精子的有害影响，采用了两种以上的稀释方法，即精子采集后，将第一种不含甘油的溶液稀释至最终稀释比的一半，然后缓慢冷却（不少于60分钟）至4分钟后，加入第二溶液，在相同温度下加入等量甘油-5.℃. 第二种液体可以添加一次或多次，然后慢慢滴下。甘油的最终浓度通常为7%。近年来，在实验的基础上，我国采用了单稀释法。也就是说，精子采集后在同一温度下用含甘油的稀释液稀释精液一次，也取得了良好的冷冻保存效果（精液的低温平衡是指精液在4-5℃保存的时间）℃ 加入含甘油的稀释剂后。在此之前，稀释的精液应该冷却到4-5分钟℃. 具体方法是：将精液容器用纱布、棉布包好，或放入同一温度的水中，再放入0~5分钟℃冰箱，1小时后即可达到降温的目的。我国不同国家牛精液冷冻前的平衡时间不同，一般需要2～4小时（冷冻前可用玻璃安瓿、塑料管、颗粒等分离牛精液）。目前，后两种方法被广泛应用，而细管法的数量也在不断增加。颗粒法虽然具有体积小、操作简单、成本低、冻结效果快等优点，但也存在着不易标记、易损伤和污染、解冻和再稀释等问题。该方法具有卫生条件好、体积小、冷冻快、精子丢失少、易于标记等优点适合机械化生产。到目前为止，颗粒冻结法在我国仍得到广泛应用，但已逐渐向细管冻结法过渡。精液分装前，塑料管要用打印机标明（牛号、品种、生产日期等），并用紫外线消毒。分装由专用机械进行，分装后可放入0-5℃. 冰箱的冷却时间与粒子法相似。冷冻时，将平衡管放在纱网上，离液氮表面2-3cm，停留7-8分钟，然后浸入液氮中。经抽检合格后，可按一定包装进行包装液氮被广泛用作冷冻牛精液的冷源。将颗粒精液冷冻在液氮冷却的氟板（聚四氟乙烯）、铜纱布和铝板上。精液表面与液氮表面保持一定距离（1-2cm）。在冷冻过程中，温度为80-120度℃ 应该保持。平衡的精液应在冷冻前充分混合。精子活力检测。快速均匀滴入，每毫升稀释精液约10滴。滴冻结束后，静置2-3分钟，待所有颗粒冻结后，立即加入液氮。解冻活性率大于0.3时，可采用纱布袋包装，贴好标签后用液氮保存。每滴公牛冷冻精液后，必须更换氟板和其他器具。目前，细管的容量分为0.25毫升和0.5毫升，由无毒塑料（PCE）制成。管的一端装有棉塞和聚乙烯粉末，粉末遇水前能自动固化密封，授精时成为推进器，是输送精液的活塞；注射精液后，另一端可用聚乙烯粉末或钢球（或塑料球）密封。应注意，se之间有10-13mm的空间冷冻（精液储存和解冻

（1）牛的冷冻精液以液氮作为冷源储存，必要时可随时取出。为防止温度变化对精液质量的影响，取放动作要迅速，尽量减少在空气中停留的时间。从储存容器中提取冷冻精液时，精液不得超过液氮容器的颈底，以免温度升高导致精液解冻活性下降。牛的冷冻精液已有40多年的历史。结果表明，fr臭氧精液仍具有受精能力。但一般认为冷冻精液的运动能力和受精能力随着保存时间的延长而逐渐下降。牛冷冻精液长期保存的确切时限有待进一步研究和观察（解冻后的冷冻精液解冻过程会影响精子活力，因此应注意解冻温度和操作方法）。起初，世界各国对解冻温度的要求不同，可分为高温40℃, 室温15-20℃ 和冷水10℃. 目前解冻效果为40℃ 是最好的。随着解冻温度的降低，精子活力下降逐渐减少。解冻方法：将一定量的解冻液预热至40℃℃ 通常用于解冻颗粒精液，放入其中摇匀解冻。解冻液可以是2.9%柠檬酸钠溶液或3%葡萄糖和1.4%柠檬酸钠溶液。灭菌密封后，可长期使用。解冻精液时，封口端向上，棉塞端向下。将精液放入温水中约40分钟℃ 一旦精液颜色改变，就把它拿出来进行人工授精。解冻后的精液应立即取样以检查活力。可以使用0.3以上的。如果大量授精的奶牛，也可以随机抽取b在受精前。解冻精液的精子存活时间较短，为保证较高的受孕率，几乎所有精液都在授精后几分钟至一小时内解冻。为方便国内外人工授精工作者，将冷冻精液放入囊中，在授精前用体温解冻是一种简单有效的方法。发情期短，约20小时。排卵一般发生在发情期结束后10-16小时。因此，准确的发情鉴定和及时的授精是提高受孕率的有力保证。insemi的实践对奶牛的调查结果表明：在发情末期或发情后期开始时，奶牛接受爬升；在卵泡发育后期或卵泡成熟期，人工授精可获得最佳的妊娠效果。从杂交开始到排卵期的发情无回复率表明没有发情回复；受孕率以第8～24小时最高。授精人员应掌握以下规律：早晨接受爬坡的奶牛应在当天下午授精，次日上午仍接受爬坡的奶牛应再次授精；如果母牛是艾尔它们可以在下午或晚上爬，可以推迟到第二天早上受精。如果由现场人员授精，一般在第一次授精后12小时内进行第二次授精。如果是一小群个体饲养的奶牛，授精时间应更灵活（

（2）授精地点和频率

（1）大量的授精地点试验证明，宫颈深部授精的受胎率没有显著差异，子宫体、排卵侧或排卵侧子宫角。目前，宫颈深部人工授精应用广泛（除奶牛自身原因外，奶牛受胎率主要受以下因素影响）精液质量和发情鉴定的准确性。如果精液质量好，发情鉴定准确，单次授精可获得满意的受孕率。由于发情和排卵的时间在个体间差异很大，一般掌握一两次是合适的。盲目增加受精次数，不仅不能提高受孕率，有时还可能引起一些感染，子宫或生殖道疾病（有两种人工授精方式：开放式人工授精和直肠控制式人工授精

（1）用开瓶器授精的方法是在开瓶器的帮助下扩大奶牛的阴道，并使用一定的光源（d管、前视镜、前灯等）找到宫颈外口，将输精管插入宫颈1-2厘米，注入精液，然后取出输精管和扩张器。这种方法虽然简单易掌握，但授精部位浅，易感染，受孕率低。直肠控制宫颈的方法与直肠检查相似。一只手戴上薄膜手套，伸入直肠，取出粪便，寻找宫颈，握住宫颈外口，使宫颈外口与小指形成的环平齐（图3-4）。用伸入直肠的手臂打开阴部将另一只手持式输精器插入阴部裂（插入时应先向上倾斜，再转向水平方向，不要将输精器插入尿道口）。用手握住宫颈外口，用手握住授精器，授精器会慢慢越过宫颈内侧的皱褶（一般为42），然后注入精液。抓宫颈时，位置要适当，这样有利于双手的配合。它既不可靠，也不太靠后，否则很难将授精器插入宫颈深部。直肠控制宫颈是一种常用的插入方法在国内外。具有器械简单、感染少、受精部位深、受孕率高等优点。该方法的受胎率比开瓶器法提高10%～20%，大大提高了奶牛的繁殖率和经济效益。同时，奶牛子宫和卵巢的变化可用于判断发情期或妊娠期，预防流产或流产。人工授精技术对受孕率有很大影响，经验丰富的人工授精工作者可以获得最佳受孕效果。在炎热的气候下，奶牛发情时间短，全天授精有效。在这种情况下，奶牛饲养者往往可以得到更好的r结果通过自己的人工授精操作，而一定程度的人工授精技术培训是获得最佳效果的保证。定期对人工授精人员进行评估，有助于评估和提高人工授精质量和受孕效果。精液应贮存在容器中，容器应定期检查，以获得良好的妊娠效果

4.确定从产犊到第一次授精的最佳间隔

产犊后早期第一次授精可提前奶牛的妊娠时间，但产犊后早期繁殖是不明智的，因为：① 产后早期哺乳需要一段时间来恢复身体；② 第一个出生的年轻人在下次怀孕之前，w还没有完成自己的发育；③ 产后早期妊娠率很低；④ 实践证明，产犊间隔小于365天是不利的；⑤ 更重要的原因是哺乳期不足305天。因此，许多生产者将一些高产牛的第一次交配时间控制在分娩后85-95天。5、 奶牛经过全人工授精后很难成功受孕，有时重复授精后不能受孕；虽然有些人可以正常怀孕，但有时怀孕后会发生胚胎死亡和流产。妊娠第一天的妊娠失败通常称为胚胎死亡；中断妊娠43天至151天的流产称为胎儿死亡；在此之后怀孕的中断被称为流产。因此，人工授精后继续观察发情是非常重要的。特别是那些被认为怀孕的奶牛，因为它们在受精3周后没有发情期，所以应该给予更多的关注。已授精3～6周的奶牛也应连续观察。如果发现她们反复发情，应及时再次授精，避免浪费时间和经济。如果最后一次授精6-8周后没有发情，应进行妊娠诊断。如果重复授精后没有妊娠，应在ti中消除我。如果牛群中有许多奶牛出现类似问题，应及时检查和处理。实践证明，上述问题往往是管理不善造成的。

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