为了有效提高波尔山羊育种水平，提高波尔山羊新品系的杂交育种水平，有效利用波尔山羊种质资源，开展了波尔山羊冷冻精液的生产和受胎试验。在初步试验的基础上，进行了中心试验。在江苏、山东和河南省9个县的47个繁殖站（点）用冷冻精液喂养了4204只母羊。第一次发情受胎率为71.21%。结果报告如下：

1.材料与方法

1.1精液采集。采用假阴道法收集精液。精液颜色、气味要求正常，pH值6.4-6.8，密度大于1。50亿/ml，活力大于0.75。收集的精液根据密度和活力以1:2-5的比例稀释（

1.2稀释剂A:6G乳糖、1.5g柠檬酸钠和100ml蒸馏水。乙方：乳糖3.8克，葡萄糖2.6克，柠檬酸钠1.3克，蒸馏水100毫升。丙方：乳糖4.6克，葡萄糖3.1克，柠檬酸钠1.5克，蒸馏水100毫升。取80 ml溶液a、B和105 ml溶液C。在冰箱底层1-4℃的条件下，分别加入20mL蛋黄、5mL甘油和100000单位青霉素和链霉素（

1.3天平，将稀释密封的精液放入冰箱进行平衡（

1.4冷冻精子颗粒的制备les采用铝盒氟板冷冻法。将氟板浸入装有液氮的铝盒中。沸腾停止后，取出氟板，放在液氮上方2-3cm处滴冻。剂量为每粒0.1ml（

1.5解冻：使用水浴快速解冻。将0.5 ml含有1.8-2.9%柠檬酸钠的解冻溶液放入试管中，并在45-60℃的温水中加热1分钟。将冷水颗粒放入试管，摇匀溶解至2/3后取出，轻轻摇匀至完全溶解（

1.6阴道和宫颈两种精子输送方式（

2.试验结果

2.1稀释剂筛选

采用三种不同的稀释液进行冷冻效果的比较试验。从冻后存活率和恢复率两个指标来看，配方C的效果最好，重复解冻后的存活率在45%以上。与甲方和乙方相比，差异非常显著（P<0.01）。结果见表1

表1不同稀释剂的冷冻效果比较（单位：%）

配方代码

重复次数

原始精子活动率

冷冻前活动率

解冻活动率

重组率

甲方

8

83

65

22

29.73

（

乙方

15

81.8

71.7

27

35.34

丙方

24

82.4

78.6

49.7

61.97

2.2冷冻技术试验

2.2.1不同平衡时间对冷冻效果的影响在特定的冷平衡条件下，精子回收率为15分钟、30分钟、1小时、1小时、1.5小时，2h和3h分别为46.67%、52.63%、64.52%、60%、60.8%和55.17%。1小时的解冻率最高，15分钟和30分钟的解冻率最低。随着平衡时间的逐渐延长，解冻活动率逐渐延长，解冻活动率逐渐降低（

2.2.2氟板与液面之间的距离对冻结效果的影响。联合国在离液氮面1、2、3、4cm的氟板条件下，精子的原始活力为0.75。当平衡活力为0.7时，精液分别冷冻。重复观察15次，冻存活力分别为0.4、0.55、0.45和0.4。离液氮面2cm的氟板冷冻效果最好，精子回收率为75.86%，分别比1cm、3cm和4cm高20.69%、13.79%和20.69%，但差异不显著（P>0.05）（

2.2.3采用8种不同的水温梯度：35℃、40℃、45℃测定了不同水温对冷冻精液解冻活性的影响54001

3.受孕效果试验

选用配方C稀释液制成冷冻精液颗粒，对母羊进行受孕效果试验，以进口新鲜精液和自然交配为对照组。结果冷冻精液组第一次发情受胎率为71.21%，新鲜精液组为75.24%，自然交配组为75.56%，冷冻精液组的受胎率分别比新鲜精子组和自然交配组低4.03%和4.35%，但组间差异无统计学意义（P>0.05）。结果如表2所示（

表2：冷冻精液的妊娠效果和比较（单位：件冷百分比

组

试验类型

颗粒类型

数量种羊

调查绵羊数量

怀孕绵羊数量

受孕率

羔羊数量

羔羊数量

试验

试验

组冷冻精液

初始试验

波尔山羊

21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21波尔山羊

2210

1100

786

21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 2121

1511

71.21

1453

3094

212.94

控制组

鲜精

本地山羊

450

315

237

75.24

231

486

205.06

（

自交

本地山羊

34

75.56

34

74

211.43

3.1的影响母羊年龄和胎次对受孕的影响基本一致，母羊年龄与胎次呈极显著正相关。将母羊按1岁以下、1～2岁、2～3岁和3岁以上年龄分为4组。第一发情期冷冻精液交配受孕率分别为63.04%（46/29）、76.89%（212/163）、71.08%（83/59）和63.79%（58/37）。母羊按处女1-3、4-6和6头以上分为4组ere分别为62.69%（67/42）、74.38%（160/119）、72.11%（147/106）和68.00%（25/17）。1-2和1-3的受胎率最高，其次是2-3和4-6。但各组间无显著差异（P>0.05）

3.2不同授精方法对259只经宫颈授精的母羊妊娠效果的影响统计结果为：受胎率为78.76%，比阴道授精的60%（140/84）高18.76%（P<0.01）（

3.3不同颗粒数对受孕效果的影响。38只母羊接受了双颗粒宫颈人工授精。结果受孕30例，受孕率78.95%。其余59只母羊接受1粒宫颈口内注射反倾销。结果共受胎41例，受胎率69.49%。前者比后者高9.46%（P>0.05）（

4.讨论与分析

4.1根据波尔山羊新鲜精液按1的比例稀释的结果∶ 每只绵羊50和0.5毫升可保持较高的受胎率，冷冻精子颗粒用0.5毫升解冻液重新稀释，使母羊有效精子输入量约为2000万（1粒）。受胎率仍为69.49%，但比4000万粒（2粒）的受胎率低9.46%（P>0.05），与鲜香精的受胎率相近。实验得到的结果是一致的。因此，我们建议波尔山羊冻精颗粒中的ve精子应为3000-4000万（

4.2波尔山羊冻精颗粒生产过程中，必须保证平衡后精液温度不升高，否则往往会影响冷冻精液颗粒的解冻活动率（

4.3由于处女羊体型小，开腔器使用困难，阴道授精的使用影响妊娠效果，需要进一步讨论。

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