摘要：为探讨氟苯尼考联合用药对产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌抗菌活性的影响，采用纸片扩散法测定了氟苯尼考、粘蛋白、头孢噻呋、丁胺卡那霉素、多西环素、石君净、磷霉素的最低抑菌浓度（MIC），并将氟苯尼考与上述6种药物按不同比例联合应用于E。采用微量液体二倍稀释法测定大肠杆菌。结果表明，7株E。大肠杆菌产ESBLs，对氟苯尼考、头孢噻呋和志贺兰的耐药率均为100%。对丁胺卡那霉素、多西环素和磷霉素的耐药率分别为71%、57%和57%。什么时候？氟苯尼考与粘菌素、丁胺卡那霉素、强力霉素、石君净合用，提高了抗菌活性。氟苯尼考与强力霉素按1:2比例配伍时，mic值下降幅度最大（

关键词：大肠杆菌；扩展光谱β- 内酰胺酶；氟苯尼考；联合治疗；氟苯尼考复方制剂对鸡产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的抗菌活性　　(河南农业大学畜牧兽医学院，中国郑州450002

　　摘要：测定氟苯尼考复方制剂对大肠杆菌的抗菌活性用纸片扩散法测定了氟苯尼考、大肠杆菌素、头孢噻呋、丁胺卡那霉素、强力霉素、丁胺卡那霉素、磷霉素对鸡产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的最低抑菌浓度（MIC）及不同比例的氟苯尼考组合对产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）采用液体双微量稀释法

　　结果表明，7株鸡源菌株均为产ESBLs菌株，氟苯尼考、头孢噻呋、马喹多、丁胺卡那霉素、强力霉素、磷霉素的耐药率分别为100%、100%、100%、71%、57%和57%　　COJ联合用药效果明显低于单药，以氟苯尼效果最好eo1与强力霉素合用　　关键词：大肠杆菌；超广谱β-内酰胺酶；氟苯尼考；联合用药；抗菌活性

超广谱β- 内酰胺酶（ESBLs）是质粒介导的，主要由大肠杆菌和肺炎克雷伯菌产生β- 内酰胺酶能水解青霉素。第一、第二、第三和第四代头孢菌素和氨曲南的一部分可在菌株间转移或传播[1,2]。近年来，随着第三代头孢菌素的广泛应用，产超广谱β-内酰胺酶的细菌日益增多，已成为兽医临床感染的重要病原菌。值得注意的是，产ESBLs菌株不仅对细菌具有耐药性，而且对bact也具有耐药性埃里亚β- 内酰胺类抗生素对氟喹诺酮类、氨基糖苷类、氯霉素类、四环素类等多种抗生素具有耐药性，氟苯尼考是氯霉素类广谱兽用抗生素，主要用于治疗畜禽和鱼类细菌性疾病。随着兽医临床的广泛应用，畜禽病原菌尤其是产ESBLs鸡大肠杆菌的耐药性日益严重[3,4]。因此，寻找合理的药物组合已成为控制耐药菌尤其是E。产ESBLs的大肠杆菌。鉴于此，对氟苯尼考与几种抗肿瘤药物联合进行了药敏试验使用了抗菌剂，为研制氟苯尼考复方制剂及临床合理用药组合控制产超广谱β-内酰胺酶鸡大肠杆菌感染提供依据，中国医药生物制品检定所采购；临床分离株：从山东病鸡的肝脏中分离到7株大肠埃希菌，保存于河南农业大学药理实验室

1.1.2，河南木香动物药业有限公司提供的药敏片包括FLO。rfenicol粉（95%）、myxin（90%）、ceftiofur（95%）、shijunjing（98%）、磷霉素钠（65%）、强力霉素（95%）、丁胺卡那霉素（65%）；头孢噻肟（30μ G/片），头孢曲松（30μ G/片），氨曲南（30μ G/片），头孢他啶（30μ 头孢噻肟/克拉维酸（30/10 g/片）μ G/片），头孢他啶/克拉维酸（30/10）μ

）

由北京天坛制药生物技术开发公司（

1.1.3培养基、试剂血平板琼脂（郑州安图生物技术有限公司）、麦康凯琼脂（北京奥博生物技术有限公司）、M-H琼脂（北京奥博生物技术有限公司）提供，M-H肉汤（青岛高新区海博生物科技有限公司）、G-N浓缩液（广东环卡）微生物技术有限公司）、革兰氏染色液（郑州丽丽生物工程有限公司）（

1.1.4仪器：sw cj jc超净工作台、pyx DHX防水电恒温培养箱、便携式压力蒸汽灭菌器、dzf-6050真空干燥箱、自动电子分析天平、，新飞冰箱等（

1.2方法

1.2.1菌液的制备鸡源大肠杆菌经鉴定后接种于MacConkey琼脂平板上，37℃培养℃ 选择单个菌落接种于G-N富集液中，培养16-18h，37℃过夜℃ 使细菌溶液浓度等于108cfu/ml。在试验期间，稀释的细菌溶液被稀释d 1000次，使稀释菌液的浓度为105 CFU/ml[5,6]（

1.2.2药物储备液的制备[5,6]用分析天平准确称量适量药物后，进行无菌操作，使其溶解在适当的溶剂中，并于4℃冰箱中保存℃ 待命。制备的药物在1周内用完（

　　1.2.3采用CLSI（m100-s16）推荐的方法筛选ESBLs表型。将富集培养液均匀涂于M-H琼脂上，采用标准圆盘扩散法。分别将头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松、氨曲南敏感片贴于平板上。37岁过夜培养后℃, ESBLs现象检出菌株类型，若抑菌圈直径符合下列条件之一，可怀疑为产ESBLs菌株：头孢噻肟≤ 27mm，头孢他啶

≤ 22mm，头孢曲松≤ 25毫米，氨曲南≤ 27mm（

1.2.4 ESBLs确证试验（双盘协同法）[7]按CLSI m100-s16推荐的方法，将疑似产酶的富集培养菌液均匀涂于M-H琼脂平板上，头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸，头孢他啶与头孢他啶/克拉维酸敏感片在37℃孵育后配对℃ 在同一M-H琼脂平板上过夜，两组中任何一组加或不加克拉维酸的抑制带直径均为05采用二倍稀释法测定了氟苯尼考对7株大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）。在实验中，菌液的浓度应为105cfu/ml，放置于37℃ 恒温培养箱，观察18-24小时后，能抑制细菌生长的最低药物浓度为mic（

2结果分析

2.1 ESBLs表型筛选试验和确证试验，抑制带直径鸡大肠埃希菌ESBLs表型筛选和确证试验结果分别见表1和表2（

头孢噻肟抑菌圈直径≤27mm的有6株，头孢他啶抑菌圈直径≤22mm的有7株，头孢曲松抑菌圈直径≤25mm的有5株，对氨曲南的抑菌圈直径小于或等于27mm的细菌有6株（按表2，可检出7株）。验证性试验结果表明，加入克拉维酸后，抑菌圈直径明显增大。6株菌头孢噻肟/克拉维酸的抑菌圈直径比头孢噻肟大5mm，ce的抑菌圈直径比头孢噻肟大5mm5株菌ftazidime/克拉维酸比ceftazidime大5mm。7株疑似产ESBLs菌株均为ESBLs阳性（

2.2药敏试验

结果7株临床分离的产ESBLs大肠埃希菌单药和复方药的MIC值见表3，由表3可见7株大肠埃希菌高度敏感对多肽大肠杆菌素敏感，对头孢菌素头孢噻呋耐药率100%，对氨基糖苷丁胺卡那霉素耐药率71%，对四环素多西环素耐药率57%，对喹啉志贺氏菌净耐药率100%，对磷霉素耐药率57%。这7株产ESBLs菌株不仅对该病原菌具有耐药性，而且对该病原菌也具有耐药性β- 内酰胺是对抗生素耐药，对多种药物耐药率高。当氟苯尼考与粘菌素混合时，氟苯尼考与粘菌素（1:1）的MIC与粘菌素几乎相同。当氟苯尼考与粘菌素（1:2）混合时，粘菌素的MIC普遍降低，因为粘菌素的剂量增加了一倍，可见在本实验中单独使用粘菌素可抑制7株产ESBLs大肠杆菌。氟苯尼考与头孢噻呋合用不增强抗菌活性。当氟苯尼考与丁胺卡那霉素按3种比例混合时，菌株43的抗菌活性提高，当氟苯尼考与丁胺卡那霉素的比例为1:2时，其mic值下降幅度最大当氟苯尼考与强力霉素的比例为1:2时，7个菌株的MIC值均有不同程度的下降，当氟苯尼考与石君净的比例为1:2时，57菌株的MIC值略有下降。当氟苯尼考与磷霉素合用时，当氟苯尼考与磷霉素的比例为1:1和1:2（

3

1）时，只有2株菌株的MIC降低，本实验分离到7株鸡大肠产ESBLs菌株，产ESBLs菌株的检出率为100%。近年来，随着第三代动物特异性广谱头孢菌素在雏鸡疾病防治中的广泛应用肠易激综合征和第三代医用头孢菌素的滥用，使大肠杆菌的耐药性相当严重，给临床治疗带来困难。大多数耐药细菌产生ESBLs。自1983年德国首次发现ESBLs以来，国内外报道越来越多，越来越多的产ESBLs细菌逐渐引起人们的关注（从鸡中分离到的7株产ESBLs大肠杆菌对头孢噻呋100%耐药，氯霉素氟苯尼考100%，丁胺卡那霉素71%，四环素强力霉素57%，喹啉痢疾100%，磷霉素57%。可见ES-BLS产生菌不仅是re抗大肠杆菌β- 内酰胺酶对抗生素耐药，并表现出多重耐药性。这与胡公正等人的相关报道一致，其耐药机制之一是产酶菌株对药物的失活。产ESBLs菌株能灭活青霉素或头孢菌素β- 内酰胺环断裂β- 内酰胺药物失效。但产酶菌对多种药物的多药耐药机制有待进一步研究（

3）氟苯尼考是一种广谱的动物抗生素。它是氯霉素的同系物。其作用机理和抗菌谱与氯霉素和甲砜霉素相似。氯霉素ha严重的不良反应导致再生障碍性贫血，氟苯尼考弥补了这一不足。因此，氟苯尼考在动物疾病防治中取代氯霉素，在兽医临床上发挥着重要作用[8,9]。近年来，由于抗生素的滥用，产生了大量的耐药菌株，氟苯尼考

的抗菌作用逐渐减少，人们不得不根据本实验的结果寻找新的解决方案，当氟苯尼考与6种药物合用时，与头孢噻呋合用完全无效，与理论相符。头孢噻呋是一类速效杀菌剂，氟苯尼考是一类Ⅲ类速效抗菌剂，Ⅲ类药物与Ⅰ类、Ⅲ类药物合用能迅速阻断细菌蛋白。因此，Ⅰ类药物与Ⅰ类药物合用时，后者的活性可能减弱，不宜合用。其他几种药物能提高某些细菌

的抗菌活性，效果最好的是1:2，其中氟苯尼考与强力霉素1:2的组合对7株细菌的MLC值下降幅度最大，是6种组合中效果最好的，这与袁莉等[10]的报道一致。对氟苯尼考耐药的产超广谱β-内酰胺酶菌株的抗菌活性显著高于对氟苯尼考耐药的产超广谱β-内酰胺酶菌株联合用药后症状有所好转。可见，联合用药是控制产ESBLs菌株感染的有效途径（

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[4]胡公正，张春辉，梁军，等.检测与评价猪和鸡病原菌口服内酰胺酶和超广谱p-内酰胺酶的药敏试验[J]。中国农业科学，2005，38（2）：399-404.

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[7]胡公正，匡秀华，袁莉，[J]。中国人兽共患病杂志，2006[J]。兽医学报，2006，42（8）：52-53.

[10]袁莉，胡公正，刘志明，[J]。河南农业大学学报，2005, 39（1）：93-97

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