新城疫（nd）、传染性支气管炎（IB）和传染性法氏囊病（IBD）是三种传染病。它们通常用相应的单一疫苗多次免疫，不仅费时费力，而且会引起鸡的应激反应。目前，国外已研制出新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病减毒疫苗。近年来，国内在这方面的研究工作已经展开。新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联疫苗由于品系不同、制备工艺不同、病毒培养方法不同，对鸡的免疫效果也不同用鸡胚尿囊腔同源异型培养se（NDV）LaSota株和传染性支气管炎（IBD）H120株，用鸡胚成纤维细胞旋转三维培养ibdb87株。将含病毒的鸡胚尿囊液和细胞毒液按筛选比例冻干，制备新城疫传染性支气管炎IBD三减毒疫苗，以了解疫苗的性能，材料与方法

（1）材料

鸡新城疫传染性支气管炎传染性法氏囊病三联减毒疫苗、巯基乙酸培养基（T.G）、酪酮琼脂（G.A）和改良弗雷培养基本课题组（

新城疫f48e9，传染性支气管炎M41和传染性法氏囊病bc6-85购自中国兽药检定所（

14日龄非免疫鸡由本试验鸡场提供（

（2）检测方法

冻干后理化性质观察，观察疫苗的颜色、孔隙率、是否能从瓶壁脱落、加入稀释液后的溶解度（

无菌试验：每批随机抽取4份冻干疫苗，用无菌生理盐水稀释至原量，用两支巯基乙酸培养基（T.G）管和两支酪蛋白琼脂（G.A）斜面混合接种，0.2ml每人一张，36人一张± 1级培养℃; 一个支架25± 细胞在1℃ 3-5天（

支原体试验：每批冻干疫苗混合后随访，将5ml疫苗混合物接种于改良的弗雷培养基中，再从瓶中取出0.2ml疫苗混合物接种于小管液体培养基中。在37℃培养小瓶和小管℃ 同时，每天观察培养物的颜色变化。如果5-7天内没有变化，从瓶中取出0.2毫升，移植到另一管液体培养基中，置于37℃ 5-7天，重复3次。如果没有变化，在最后一次接种后14天停止观察n（

在观察期间，如果发现小瓶或任何小管中培养物的颜色发生显著变化，则pH值变化10%± 5、应立即移栽于管状液体培养基和固体培养基上，观察液体培养基中是否有恒定的pH值变化，固体培养基上是否有典型的卵形支原体菌落（

，用真空干燥法测定残余含水量。测定前，将洗净干燥的称量瓶置于150℃干燥℃ 烘箱干燥2小时，放入氯化钙罐冷却后称重。迅速打开真空良好的疫苗瓶，将产品倒入称量瓶，c在天平上称一下。每批取4个样品，立即将称量瓶放入含P2O5的真空干燥箱中，打开瓶盖，真空（133.322~666.61pa），加热（60~70℃）℃) 干燥3小时。然后介绍了氯化钙吸收的干燥空气。当真空干燥箱温度稍有下降时，打开箱门，迅速关闭称量瓶盖，将所有称量瓶移入加氯钙的干燥罐中，冷却至室温后称量，再移回真空干燥箱继续干燥3小时。经过两次干燥，达到定量，失重为含水率（含水率每瓶不超过4%）（

计算公式：含水率%=（干燥前样品重量-干燥后样品重量）/干燥前重量× 100

真空试验用高频火花真空检测器照射疫苗瓶，观察是否有紫光（

安全性试验：每批随机抽取4种疫苗，稀释并充分混合。对30只14日龄雏鸡颈部皮下注射10剂，观察14天有无异常反应（

新城疫疫苗效力试验：将20只14日龄健康未免疫雏鸡随机分为两组，每组10只；每只鸡鼻内接种用一剂新城疫传染性支气管炎传染性法氏囊病三联减毒疫苗。免疫前、免疫后7天和14天采集翼静脉血样β- 采用微量血凝抑制试验测定血清新城疫抗体水平。14天后，所有鸡肌肉注射10 000 eld50新城疫f48e9毒力1毫升/只，观察10-14天。计算免疫鸡的保护率和未免疫对照鸡的发病率和死亡率（

传染性支气管炎药效试验：将20只14日龄健康未免疫鸡随机分为两组，每组10只各组均为ckens。第一组为对照组，不接种疫苗，第二组为实验组。每只鸡鼻内接种一剂新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联减毒疫苗。免疫前、免疫后7天和14天采集翼静脉血样β- 采用微量血凝抑制试验测定血清中传染性支气管炎抗体水平。14天后，用10倍稀释的ibm41毒力液滴鼻，每只鸡1～2滴，观察10～14天。对免疫鸡的保护率和未免疫对照鸡的发病率、死亡率进行了测定鸡传染性法氏囊病

药效试验：将20只14日龄健康非免疫鸡随机分为两组，每组10只。第一组为对照组，不接种疫苗，第二组为实验组。每只鸡鼻内接种一剂新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联减毒疫苗。用AGP法测定IBD抗体阳性率。20天后，免疫鸡和对照鸡用50剂ibdbc6-85强毒0.05ml攻毒，72小时后处死，观察IBD的变化

疫苗的免疫期用亚切法测定）用新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三减毒病毒颈部注射20只14日龄未免疫健康雏鸡，自免疫后第14天起每14天注射疫苗0.2ml（含1剂）β- 用微量血凝抑制试验测定血清新城疫和传染性支气管炎抗体效价，用AGP法检测IBD抗体阳性率，直至血清抗体水平降至公认的保护性抗体水平（鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三减毒病毒冻干疫苗于-25℃冷冻保存）℃ 通过物理性能观察后保存和实验室试验；每3个月免疫10只14日龄鸡，另设10只作为对照。免疫后14d采集血样分离血清，检测新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病抗体水平，确定疫苗的保存期（结果

。结果表明，冻干疫苗呈红色海绵状、疏松团块，易与瓶壁分离，加入稀释液后能迅速溶解

疫苗无菌试验表明t.g.管、g.A.管和对照管（支原体）均无细菌生长

疫苗试验，7天重复培养3次，最后14天培养，小瓶和小管中的培养基没有变黄或变红，表明三批疫苗均无支原体污染（由下表1可见，三批新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联减毒疫苗残留水分均小于4%，符合国家标准（

表1新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联疫苗残留水分（%）

的要求uency spark真空试验机，三批疫苗瓶中均出现紫光，说明真空度试验合格（观察14天后，接种10剂新城疫传染性支气管炎传染性法氏囊病三减毒疫苗的30只鸡生长良好，无异常精神状态及食欲。（

疫苗效价试验新城疫效价试验：由下表2可见，试验前对照组与试验组抗体水平无显著性差异（P>0.05），而对照组和实验组的抗体水平在试验后7天和14天有显著性差异（P<0.01）。结果是f激发试验显示实验组100%（10/10）的患者得到保护，对照组100%（10/10）的患者死亡。可见，一剂新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联减毒疫苗可在7天内产生免疫，免疫后14天对新城疫毒力攻击的保护率为100%，说明该疫苗对鸡新城疫有预防作用（

表2新城疫

传染性支气管炎药效试验结果：从表3可以看出，对照组与试验组抗体水平无显著差异试验前l组（P>0.05），但试验后7天和14天，对照组与试验组抗体水平差异极显著（P<0.01）。攻毒试验结果显示，实验组100%（10/10）得到保护，对照组90%（9/10）死亡。可见，一剂新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联减毒疫苗可在7天内产生免疫力，14天内对传染性支气管炎毒力攻击的保护率为100%。结果表明，该疫苗能有效预防鸡传染性支气管炎

表3鸡传染性支气管炎

e的药效试验结果传染性法氏囊抗体检测：由下表4可见，检测前对照组与实验组传染性法氏囊抗体阳性率无显著性差异（P>0.05），但试验后7天和14天，对照组与试验组抗体阳性率差异极显著（P<0.01）。攻毒72小时后尸检结果显示，实验组10只鸡中有7只法氏囊无明显改变，3只法氏囊有不同程度的损伤，疫苗保护率为70%；相比之下，10个别致的法氏囊对照组可见法氏囊体积增大，重量增加，法氏囊壁增厚，呈黄色，囊表面覆盖一层蛋白胨样黄色渗出物，纵条纹，囊腔内充满混浊粘液和干酪样渗出物，这是100%的病例。结果表明，鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联弱毒冻干疫苗对预防传染性法氏囊病有良好效果（

表4 IBD效价检测结果（%）

疫苗免疫期的测定见下表5。14日龄鸡用trip免疫e弱毒冻干疫苗，抗体滴度从14天逐渐升高到28天，从42天逐渐下降，70天仍能检测到较高水平的抗体（或阳性率）。结果表明，新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联减毒疫苗的免疫期至少为60天（

表5免疫期试验结果

疫苗贮存期试验从下表6可以看出，本试验使新城疫具有传染性支气管炎传染性法氏囊病三联减毒疫苗于-25℃保存℃ 接种后1、4、7、9、12个月，14天抗体效价为7.5分别为7.4、7.4、7.2和7.3；传染性支气管炎抗体效价分别为7.3、7.4、7.2和7.0；IBD抗体阳性率分别为80%、70%、80%、70%和70%。免疫功能下降程度不明显。因此，鸡新城疫传染性支气管炎传染性法氏囊病D型三联减毒疫苗保存期为-25天℃ 至少一年（

表6保存期测定

结果

3结论

1.用鸡新城疫LaSota三种抗原制备鸡三减毒冻干疫苗，传染性支气管炎H120和传染性法氏囊B87按一定比例真空度试验合格，in符合《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》

2。疫苗的安全性检验直接关系到疫苗的应用。本试验采用10剂鸡新城疫传染性支气管炎感染法，结果表明，用法氏三重减毒囊冻干疫苗免疫鸡，其精神状态和食欲均无异常表现，说明该疫苗对14日龄以上雏鸡无毒副作用，安全性好（

3.效价试验是验证疫苗应用效果的关键。本试验用新城疫病毒注射雏鸡鸡传染性法氏囊病三联减毒疫苗对14日龄未免疫鸡能产生高水平的抗体，并能抵抗新城疫病毒的侵袭，表明该疫苗的三种抗原对鸡产生较强的免疫应答，结果表明，鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊病三联减毒疫苗免疫14日龄雏鸡，抗体滴度（或阳性率）高，免疫效果好。抗体滴度（或阳性率）下降，免疫效果减弱，但仍有一定的效果鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三弱毒冻干疫苗在-25℃保存12个月℃, 免疫后抗体水平（或阳性率）变化不大，故认为该疫苗的保质期为12个月（

作者简介：刘瑞生（1968-），男，硕士，助理研究员，从事畜禽疫病防治研究

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