马立克氏病（MD）是鸡的一种淋巴增生性疾病。该病的致病因素是马立克氏病病毒（MDV），属于疱疹病毒。世界动物卫生组织（OIE）已将MD列为B类传染病。该病是第一种可以通过疫苗预防的癌症疾病，因此受到医学界、兽医界和病毒学界的广泛关注。到目前为止，还没有有效的方法治疗MD鸡，该病仍由疫苗预防和控制，因此MD疫苗的研究一直是国内外学者研究的热点，三种血清型可单独使用或联合使用（

1.1血清I型疫苗

通过MDV通过细胞培养连续传代而减毒。疫苗中含有的病毒与细胞结合。只有保证细胞的完整性，疫苗才能具有免疫原性。第一种Ⅰ型疫苗是英国学者丘吉尔等人研制的hprs-16/att疫苗。随后荷兰学者RISPENS等人通过传代鸭胚成纤维细胞（DEF）获得无毒MDV株，并研制出CVI988疫苗，在荷兰等国得到广泛应用。由于该毒株具有传播性和轻微的致病性，该疫苗在1990年后才在英国获得批准。同时，从CVI988衍生的疫苗，称为克隆C，也被报道对强毒力MDV感染有效。这种疫苗在很短的时间内才在美国推出并应用，很快就退出了在美国的应用。814株是哈尔滨兽医学院上世纪80年代研制的另一种疫苗。它可以被广泛的世代使用。抗母体抗体稳定安全。目前，常将Ⅰ型弱毒株与DNA重组技术相结合开发新疫苗

1.2血清Ⅱ型疫苗

是一种天然筛选的弱毒疫苗。血清Ⅱ型MDV是一种天然的非致病性病毒，广泛分布于鸡体内。这种疫苗病毒可以通过接触法分离感染后5周产生较强的免疫力。1988，江苏农业大学的黄世夏和其他人分离出II型Z4减毒株，这是中国唯一的II型MD疫苗株〔5〕。这种血清型的代表是SB-1株，它可以单独使用，产生广泛的保护作用，但它对超强毒力菌株没有抵抗力。可与HVT疫苗配合使用，充分抵抗强毒株。商业SB-1疫苗在美国和其他一些国家有售，但在英国没有。除SB-1外，s-24和301B/12目前被用作血清型II疫苗（

1.3这种疫苗是火鸡疱疹病毒（HVT）疫苗。代表菌株fc-126是美国学者赖特博士从土耳其分离到的一株无毒菌株。对鸡和火鸡无致病性，不在鸡体内传播；在接种疫苗的鸡中，HVT在细胞中能使机体产生抗体，但不能中和MDV。疫苗有干扰作用。它在MDV感染前侵入鸡体细胞，并能诱导抗体阻止肿瘤的形成和发展。这种疫苗应用广泛，能有效抵抗强病毒。目前，hvtfc-126和pb-thv1c4已在使用（

1.4）二价疫苗和三价（多价）疫苗

，由于MDV超毒力的出现，部分地区单价疫苗失效世界上的灾难一再发生。为此，一些学者提出了多价疫苗的策略，先后开发了二价疫苗和三价疫苗。Witterrl报道了三种血清型MDV疫苗单独或联合使用时对强毒株和超强毒株的耐药性比较，证实了多价疫苗的有效性。美国主要采用SB-1或301B/12+hvtfc-126，西欧主要采用CVI988+hvtfc-126；我国二价苗主要有814+hvtfc-126、SB-1+hvtfc-126和Z4+hvtfc-126，目前我国三价苗主要由814+SB-1+hvtfc-126组成tivalent疫苗只能在液氮中储存和运输，成本很高（

2 MD基因工程疫苗

随着生物技术的发展及其在疫苗研究领域的广泛应用，科学家们致力于研究免疫效果更好的抗MD基因工程疫苗，以

2.1鸡痘病毒为载体的重组MDV疫苗

鸡痘病毒（FPV）是目前分子量最大的动物病毒，其总长度约为300kb。这是一个很有前途的矢量系统。研究人员发现MDV糖蛋白gB具有良好的免疫原性。陈和Ross先后对MDVgB基因进行了克隆和测序，发现由GB编码的100ku糖蛋白复合物能刺激MDV的免疫保护反应。Nazariank等建立了表达GB的重组FPV，GA株GB蛋白具有良好的免疫保护作用。重组病毒能保护MDV，vvmdv（super-MDV），vvmdv（super-MDV）对Rbib感染有良好的免疫保护作用。Yanagidan等人以随机克隆的PFV ECORⅠ片段为重组同源DNA序列，在痘苗病毒7500bp和103bp合成PS启动子的调控下，分别表达了MDVgB蛋白和pp38蛋白，并用免疫荧光检测对重组PFV进行了筛选。小鸡们在里面用GB蛋白重组PFV免疫鸡，可获得对强毒攻击的免疫力，而用pp38蛋白重组病毒免疫鸡，则无保护作用。在MDV疫苗的研究中，除GB糖蛋白外，还应加强对MDV其他糖蛋白的研究，寻找更多的疫苗候选分子。陈志林等首次以FPV中国株为载体构建了表达mdvgi基因的重组病毒，为Gi-FPV疫苗的研制奠定了基础，为进一步开发MD多价结合基因工程疫苗提供了有效的成分。病毒已建立，但未能产生理想的保护作用，包括GC、Gd、UL47、UL48和PP38。mdv1或SB-1可诱导MHC-I限制性细胞免疫应答，而mdv1的Gd或GC无保护作用。但与FPV重组mdv1gc、mdv1gb和mdv1gd抗原混合接种的保护作用强于单独接种的保护作用。Leelf等人通过rfpvs表达mdv1的GB1、Ge、GI、GH和UL32。用rFPV/g132+HVT免疫鸡，保护率达94%

2.2hvt重组疫苗

可含有25kb的外源基因，并可插入部分外源基因。HVT重组病毒表达MDV的优势抗原是指它们具有交叉抗原反应，因此大量HVT蛋白可以用来诱导免疫应答。HVT能在鸡体内长期维持，与FPV相比，HVT能在鸡体内长期表达MDV抗原。Rossljn等[14]以HVT为载体，将GB插入TK基因区构建基因工程疫苗。虽然TK基因的破坏降低了HVT在细胞内的繁殖能力，但该低滴度重组病毒的免疫效果优于野生株。重组HVT疫苗的一个重要特点是可以插入多种外源基因，具有多重保护的潜力。人们对把它做成一个组合真空吸尘器很感兴趣电影，以防止MD和其他家禽疾病。Morganrw等[15]将新城疫病毒（NDV）的融合蛋白（f）基因和血凝素神经氨酸酶（HN）基因分别插入HVT的非必需基因US10，构建了ndvf-HVT和ndvhn-HVT两个重组体，在细胞培养和体内均能稳定、充分地感染鸡。接种ndvf-hvt重组体的鸡能同时抵抗NDV和MDV的双重攻击，以hvt为载体构建多株苗是可行的，关键是插入合适的外源基因。这种重组方法的成功主要取决于确定HVT基因的合适位点，然后插入外源基因不削弱病毒在鸡体内的复制，从而产生理想的表达。到目前为止，最合适的插入点是US10基因片段，这与未知的工作有关，hsvus10基因与hsvus10基因同源。Reddysk等[16]还构建了表达NDV的F和HN抗原、mdv1的GC和GB抗原的HVT重组疫苗。输卵管免疫对SPF鸡系统性nd和rbib有保护作用。此外，建立了表达ibdvvp2抗原的HVT重组疫苗。将IBDV的VP2抗原插入HVT的GI和UL13位点，制备重组疫苗，防止了IBDV的萎缩。HVT多重重组疫苗的成功构建既能抵抗MD，又能保护新城疫（nd）、IBD等（

[作者：张路安，李燕等]

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