
细粒棘球蚴侵染哈萨克绵羊早期血清IgE、IgM的变化规律研究
细粒棘球蚴病,也称为棘球蚴病,是一种由细粒棘球蚴幼虫(延续期)寄生在各种中间宿主(人和食草动物,如牛和羊)的肝脏、肺和其他器官上引起的人畜共患病。绵羊是细粒棘球蚴最适宜的中间宿主。绵羊包虫病严重影响了我国西部牧区养羊业的发展和农牧民生活质量的提高。包虫在宿主体内经过长期的适应过程后,能够从宿主体内吸收营养并存活下来。它基本上与外部环境隔离,并具有干扰或逃避宿主免疫反应的能力。T因此,包虫病的免疫学研究仍是当前的研究热点之一。在前人研究的基础上,以哈萨克绵羊为中间宿主,检测人工感染细粒棘球蚴后不同阶段血清IgE和LGM的变化。观察哈萨克族细粒棘球蚴感染早期血清IgE和IgM的变化。材料与方法
1.1实验动物
实验羊:哈萨克羊由新疆生产建设兵团第九师165团羊场提供,用于包虫病检测;随后,对6只健康的无包虫病的哈萨克绵羊进行了观察进行了包虫卵人工感染试验。在石河子大学动物科学技术学院实验站
细粒棘球蚴
1.2种主要试剂和仪器
试剂:sheep hydatid ELISA
。诊断试剂盒购自上海邦益贸易有限公司;绵羊血清抗体(LGE,LGM)ELISA试剂盒购自上海兰吉生物科技有限公司(
仪器:多功能微孔板阅读器(olymps-2700);恒温生化培养箱;Sgf-02.500干燥箱;台式高速离心机(
1.3吨est法
分离细粒棘球蚴:试验前,试验犬用吡喹酮和阿苯达唑(10mg/kg)治疗,然后注射二硫异松以降低其免疫力。试验犬用包虫病羊肝脏连续喂养7天。60天后在粪便中检测到细粒棘球蚴。绦虫卵的排泄物是感染棘球蚴病的实验犬。对感染包虫病的实验犬进行麻醉和屠宰。细粒棘球蚴是从小肠前段(主要是十二指肠和空肠前段)的绒毛中分离出来的。选择具有成熟妊娠节段的蠕虫CTE(蠕虫的长度为3~8mm,通常由3-4个单独的节段组成,最多7个单独的节段。头部呈梨形,末端稍窄,有顶突,顶突上有4个吸盘,顶突上有两排28-50个小钩,显微镜下分离计数(
人工感染:用注射器将成年妊娠结节直接注入羊食管,每个注射器约10000~15000个,注入生理盐水两次,以确保妊娠结节不留在注射器内。在喂食Oh、6h、8h和LOH的四个时间点,从颈静脉采集所有绵羊的外周血。收集后,在室温下静置30min,以3000r/min离心15min,取上清液于-20℃保存。参照绵羊ELISA试剂盒说明书检测血清IgE和IgM水平(
1.4数据处理
spss13.O软件进行单因素方差分析。结果
IgE检测:如表1所示,在细粒棘球蚴感染早期,喂食后各时间血清IgE浓度依次升高,但与喂食前相比显著降低(P<0.01)
IgM检测:如表2所示,在整个实验过程中l感染过程中,喂食后各时间段血清IgM浓度较喂食前明显升高(P<0.01),喂食后各时间段间无明显变化(
3.讨论与总结
IgE:重链为£ 链,以单体形式存在于血清中。它是物种进化中最新的免疫球蛋白,也是血清中最低的免疫球蛋白。半衰期约为2.8天,血清中的含量很小,仅占血清19总量的0.003%。然而,在过敏性疾病和寄生虫感染患者的血清中,特异性IgE含量显著增加。主要由e在呼吸道和肠道中,它具有免疫功能,可与肥大细胞和嗜碱性粒细胞结合,并可吸附在肥大细胞上。当第二次接触蠕虫抗原时,肥大细胞会释放组胺和其他血管活性物质,导致平滑肌收缩和肠痉挛。同时,肠壁的血管通透性增加,导致抗体渗出,吞噬细胞游出并进入外壳,增强对蠕虫的抵抗力,从而引发强烈的免疫反应。据报道,细粒棘球蚴感染者血清中的IgE抗体在肠道免疫中起着重要作用,尤其是在杀灭梅瑟菌的过程中卡里亚。体内试验表明,包虫卵从口腔感染进入体内,并通过胃和十二指肠孵化成囊蚴,大约需要2小时。本研究发现,从感染后6小时到感染前6小时,血清IgE抗体显著降低(P<0.01)。可能是现有抗体与抗原物质结合形成抗原-抗体复合物,从而导致IgE抗体降低。然而,喂食8小时后,IgE抗体开始增加,这与杜迎春的研究相同[6]。据推测,喂食8小时后,可能是6条钩虫穿过肠壁进入血液的过程。此时,蠕虫移动,蠕虫继续移动Uous释放可诱导抗原,可强烈诱导B淋巴细胞产生IgE抗体,从而增加羊血清中IgE抗体的分泌(
IgM:重链为μ链,IgM分为膜结合型IgM和分泌型IgM:膜结合型IgM为单体IgM,表达于B细胞表面,构成细胞抗体受体,也是细胞表面抗原受体的主要成分。血清中IgM为分子量为950kd的五聚体,约占血清的5%~10%。它没有铰链区。它是分子量最大的免疫球蛋白,也称巨球蛋白;LGM不能穿过血管壁,主要存在于血液中。这是一个很高的价格高效抗生物抗体。其杀菌、溶菌、吞噬和凝集作用是IgG的15倍以上。抗体的结合值和补体激活能力均大于IgG。具有高效的抗感染作用。它是物种进化和个体发育过程中产生的最早抗体,也是初始免疫应答中产生的最早抗体,机体初始免疫应答过程中产生的抗体IgM在早期感染的免疫防御中起着重要作用。血清中病原体特异性IgM水平升高有助于感染性疾病的早期诊断。Pater等人[7]在小鼠身上报告说口服多房棘球绦虫卵1周后,BALB/c小鼠(包虫病易感小鼠)的m IgM水平显著降低,直到感染后第8周才升高。本研究发现,喂食包虫卵后血清IgM抗体较喂食前显著升高(P<0.01),这与张文宝和杜迎春报道的棘球蚴感染早期可检测到IgM的结果一致。喂食后6h、8h、10h抗体浓度无明显变化。推测哈萨克族绵羊感染细粒棘球蚴后分泌的相对较高的IgM抗体可能起到免疫防御作用在蠕虫早期感染(
时,本试验跟踪监测了哈萨克绵羊人工饲养包虫卵后血清IgE和IgM的浓度,并分析了哈萨克绵羊人工饲养包虫卵后血清IgE和IgM的变化趋势。结果表明,人工取卵后10h内血清IgM抗体升高,IgE抗体降低,可为该病的临床诊断提供理论依据
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