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1.3卵母细胞采集

注射FSH 48小时后，将母羊空腹切取，在母羊腹部切开，引出卵巢，用10ml注射器（连接12号针头）和约2ml的取卵液TCM199（5%发情羊血清、100iu/ml肝素、100g/ml链霉素和100iu/ml青霉素）吸入卵巢表面2~8mm的卵泡。在固体显微镜下检测A级和B级卵丘卵母细胞复合体（COCs），并记录收集的COCs数量。比较了成年母羊、6周龄和13周龄羔羊卵巢上发育的卵泡数和卵母细胞数（

1.4卵母细胞体外成熟度收集的卵母细胞在38.5℃、5%CO2和饱和湿度的培养箱中培养24小时。培养方法为微滴培养，石蜡油覆盖。在直径为35毫米μL/滴的细胞培养皿中滴6-8滴（100毫升），在培养箱中预平衡2小时。成熟培养基为TCM-199（10%胎牛血清，10%）μG/ml促卵泡激素，1μG/ml促黄体生成素，1μG/ml雌二醇（

1.5卵母细胞体外受精

卵母细胞体外成熟24小时后，选择颗粒细胞扩散效果较好的进行受精。接受精液为含20%发情羊血清和10μg的合成输卵管液（SOF）G/ml肝素，3%牛血清白蛋白（BSA）。羊冷冻精液在37℃水浴中解冻15s，然后缓慢加入5ml精子洗涤液（10%发情羊血清，10%μG/ml肝素）混合离心（1500r/min，5min）。离心后的精子块离心，用5ml高铁氧体（1000r/min，5min）洗涤一次。去除上清液后，将精子密度稀释至5×106/ml用于体外受精。体外成熟的卵母细胞在精液中洗涤1~2次，每20μL接受精液滴入（

1.6次，移植50个卵母细胞。早期胚胎体外培养

精子和卵子受精培养24小时，洗涤2次然后转移到培养箱中平衡2小时的培养液中。将20~25枚受精卵分别转入100枚卵中，在38.5℃、5%CO2、饱和湿度下培养7~8天，培养基为μL（2%必需氨基酸、1%非必需氨基酸、2mmol/L谷氨酰胺、3mg/ml牛血清白蛋白、10ng/ml上皮生长因子）。48h计数卵裂率，每48h更换一次培养基。第8天计数囊胚率（

SPSS统计软件@独立样本t检验，单因素方差分析（

2.结果

2。。1卵泡和卵母细胞数量的比较a成年母羊、6周龄和13周龄羔羊

从表1可以看出，6周龄羔羊卵巢发育的卵泡和卵母细胞数量远高于13周龄羔羊和成年母羊，差异显著（P<0.05）。卵巢切除组卵母细胞获得率（80%）明显高于活卵收集组（65%）（

2）。。2羔羊个体差异对激素诱导效应的影响

在本试验中，羔羊的卵泡发育是由激素诱导的，羔羊之间存在较大差异。就捕获的卵总数而言，有4枚卵数在25枚以下，8枚卵数在45枚以上，5枚卵数在25~45枚之间s、 1只羔羊没有反应（见表2）（

比较2只羔羊的卵母细胞发育能力和体外胚胎发育能力。。3只成年母羊、6周龄和13周龄羔羊

从表3可以看出，6周龄和13周龄羔羊与成年母羊之间的卵裂率和囊胚率没有显著差异（P>0.05）。成年母羊组卵裂率和囊胚率略高于羔羊组。母羊年龄对卵泡数和卵母细胞数的影响不同月龄母羊卵巢上发育的卵泡数和卵母细胞数用外源激素进行ter治疗是非常不同的。6周龄羔羊卵巢发育的卵泡数和卵母细胞数最高，显著高于13周龄羔羊和成年母羊（P<0.05）。Yu Yong等[1]证明，1月龄和3月龄羔羊超排卵治疗效果的差异与血液中FSH水平有关，较高水平的FSH将促进卵巢上卵泡的发育。本研究的结果也证实了这一结论（

3.2个体差异对激素诱导效应的影响

在本实验中，母羊的卵泡发育是由激素诱导的，羔羊之间存在较大差异。在里面就卵总数而言，4只小于25枚，7只大于45枚，3只25~45枚，1只羔羊没有反应。可见，激素诱导的羔羊卵泡发育存在很大的个体差异。这一结果与成年母羊的激素诱导效应相似（

3.3母羊年龄和不同采卵方法对卵母细胞体外发育的影响

本实验表明，6周龄和13周龄羔羊在体外成熟和体外培养后获得的卵母细胞的桑椹胚和囊胚率受精率与成年母羊接近（P>0.05）。赵宏源[2]表明，从fr获得的卵母细胞的体外发育能力差异不大om 30~50日龄组和51~70日龄组。Morton[3]试验表明，6-7周龄羔羊的囊胚率高于3-4周龄羔羊（21.4%vs17.4%）。陈晓勇等[4]报道，羔羊卵母细胞和成年羊卵母细胞的体外发育能力是否存在差异存在争议。Jorio等人[5]表明，卵母细胞的体外发育能力随着年龄的增长而增加，成年绵羊卵母细胞的发育能力强于羔羊。试验结果表明，羔羊卵母细胞的发育能力略低于成年母羊。造成这种现象的原因不仅是年龄因素，而且与体外培养系统有关tem、个体体质差异等因素，但其内在机制尚不十分清楚，因此有必要扩大进一步研究的群体数量（

4结论

本实验在H+PMSG外源激素处理下对成年母羊和6周龄和13周龄羔羊进行，结果表明，6周龄羔羊卵巢卵泡数显著高于成年母羊和13周龄羔羊，卵母细胞数也显著高于成年母羊和13周龄羔羊；在体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养后，6周龄羔羊卵母细胞体外成熟后的囊胚率和fertil与成年母羊和13周龄羔羊相似。绵羊是多产动物。一个卵巢可以同时排出多个成熟卵。为了提高卵母细胞获得率，去除一个卵巢不会影响未来母羊的繁殖性能（

参考文献：

[1]于勇，钟旭，王芬露，等.绵羊不同月龄卵泡发育的比较研究[J]。中国畜牧业杂志，2012，48（9）

）

[2]赵宏远。影响山羊羔羊卵泡发育和体外受精主要因素的研究[D]。保定：河北农业大学，2009

　　[3]　莫顿　K　M、 卡特　S　五十、 麦克斯韦　W　M、 et　al.影响　属于　羔羊　年龄，霍姆　一　刺激　和　响应　到　激素　刺激　在…上　这个　产量　和　在里面　体外　发展的　能力　属于　青春期前　羔羊　ooeytes[J].重述　弗蒂尔　戴夫，2005，17:593-601.

[4]陈晓勇，邓卫涛，田淑君，等.羔羊超早期繁殖的研究[J]。《中国农学公报》，2010年，26（2）：21-25.

[5]jorio a，Mariana J C，Lahlou kassic a等。两只摩洛哥母羊从出生到4个月大的FSH模式　品种　不同的　在里面　多产性[J]　．小的　鲁明　雷斯　，（E233-1999）

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