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中草药化学成分一般鉴别方法

2024年10月15日 编辑:养殖网 浏览: 204次

中草药主要来源于植物。植物的化学成分很复杂,有些是植物所共有的,如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖、色素等。有些成分是某些植物特有的,如生物碱、糖苷、挥发油、有机酸、鞣质等(

各种化学成分都有一定的特性。一般来说,药材的外观、色、香、味可以作为初步检验和判断的手段之一。如果断面上没有油斑或挤压后有油迹,则样品中含有油或挥发油;粉层中主要含有淀粉和糖;有特殊气味的大多是一氧化碳含挥发油、香豆素和内酯;它们大多含糖;多含生物碱、苷类和苦味;酸味中含有有机酸;涩味中含有鞣质等(

中草药的化学成分是多类混合物,在分析中往往相互干扰,不易得到正确的结果。因此,必须根据其溶解度、pH值、极性等理化性质对化学成分进行鉴别(根据每种灰分成分的不同性质,选择合适的溶剂进行提取,以保证所提取的组分能够被提取(

2.样品提取物的浓度样品提取物的pH值不应影响鉴定反应所需的pH值。如有较大差异,应提前调整(

4。当提取物较深时,易影响鉴别反应的效果。此时可适当稀释或进一步纯化(为避免假阳性或显色误差,应注意防止多组分相互干扰。在进行化学鉴定的同时,应进行空白试验和对照试验(以已知中草药或含有某些成分的纯品为阳性对照)(

6)在试验中,如果某一类成分的几种鉴定反应结果不一致(即有的阳性,有的阴性),则应进行综合分析。首先要注意阳性试验是否属于这类组分的特异反应,否则要检查其他组分是否能产生这种反应,并从多方面进行判断。但也要注意的是,有些反应只能对某一目标进行,某一类组分中的某一化学基团是反应性的,如查盐酸镁粉试验中的黄酮类化合物,它只对羟基黄酮类化合物(黄酮醇)有明显的反应n黄酮类化合物,而其他黄酮类化合物并不明显,但不能轻易否认它们不是黄酮类化合物。为了避免孤立和片面的结论,必须综合考虑综合分析(

中草药化学成分的一般鉴别试验只是初步判断,最终确认需进一步纯化,待鉴定后确认(

(2)鉴定方法

1.蛋白质、多肽、氨基酸

(1)加热或矿物酸试验:取样品水溶液1ml于试管中,加热至沸腾或加5%盐酸,如果出现浑浊或沉淀,则表明其含有水溶性物质蛋白质(

(2)缩二脲试验:取样品水溶液1ml,加入2滴10%氧化钠溶液,充分摇匀,逐渐加入硫酸铜试液,随加入摇匀,注意观察,如有紫色或紫红色,它可能含有蛋白质和氨基酸(

所有具有两个或两个以上肽键(-CONH-)的蛋白质在碱性溶液中都能与Cu2+反应形成一系列显色反应。二肽为蓝色,三肽为紫色,肽键较多的为红色。肽键越多,颜色越红(

(3)茚三酮试验:取样品水溶液1ml,加入2-3滴茚三酮试验溶液,加热煮沸4-5分钟,等待冷却时呈红棕色或蓝紫色(蛋白质、蛋白胨、肽和氨基酸)(

   α 氨基酸与茚三酮的水合作用导致氨基酸氧化成醛、氨和二氧化碳,而茚三酮被还原成仲醇并与氨和茚三酮缩合形成蓝紫色化合物(

[注]茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂,反应在1小时内稳定。试剂溶液的pH值应为5-7,必要时可加入几滴吡啶或醋酸钠(

② 该反应非常灵敏,但有些氨基酸呈黄色而不是紫色,如脯氨酸(

(4)氨基酸TLC检测n反应:

吸附剂:硅胶G(

② 显影液:(1正丁醇:水(1:1)(2)正丁醇:乙酸:水(4:1:5)

3.显色剂:0.5%,三酮丙酮溶液,1100烘箱中喷雾5分钟,呈蓝紫色或紫色

2.皂甙

(1)泡沫试验:取试样的水溶液2ml于塞子的试管中,用力摇动3分钟,即产生持久的蜂窝状泡沫(保持10分钟以上),泡沫量不少于液体体积的1/3

[注]常用的增溶剂Twain和PATE在摇动时会产生持久的泡沫

(2)溶血试验:取4支试管,分别加入0.25mL、0.5mL、0.75mL滤液e,依次加入2.25ml、2.0ml、1.75ml、1.5ml生理盐水,使每根试管中的溶液变为2.5ml,然后在每根试管中加入2.5ml 2%血细胞悬液,摇匀,置于370水浴或25-270室温下观察溶血情况,一般观察3小时,或先在显微镜下滴下红细胞,再加入试液,观察血细胞是否消失。如果有溶血,则显示阳性反应(

[注]① 单宁能凝集红细胞,干扰溶血试验的观察。应提前去除(可被神经酰胺粉末吸附或被明胶沉淀)(

② 试验溶液应ld为中性(

(3)醋酐浓硫酸试验(liebrmann-Burchard反应)将试样水溶液置于蒸发皿中,在水浴上蒸发,加入少量冰醋酸溶解残渣,再加入醋酐浓硫酸(19:1)试验溶液,红紫色变脏绿色(甾体、氯仿、三氯甲烷)三萜或皂甙

(4)分化的甾体皂甙和三萜皂甙:从试管中取出两管,每样1ml,1ml加0.1N盐酸溶液,另取0.1N加氢氧化钠溶液,摇晃1分钟。含三萜皂苷;如果碱管内泡沫多为酸管,甾体皂苷均显示(三萜皂苷是酸性皂甙,在酸性水溶液中形成稳定泡沫。甾体皂甙是中性皂甙,在碱性溶液中形成更稳定的泡沫

3.糖、多糖或糖苷

(1)碱性酒石酸铜试液:取试样水溶液1-2ml(如为乙醇溶液,则必须将乙醇蒸发),加碱性酒石酸铜试液1ml,在沸水浴中加热5分钟,产生棕红色或砖红色的氧化亚铜沉淀,说明还原糖(

还原糖能将二价铜盐(蓝色)还原成氧化亚铜,而aldeh醛糖的醛基可氧化成羧基:

[注]试液呈酸性时,应先碱化(

② 由于反应条件的不同,该反应生成的沉淀有不同的颜色:颗粒上呈黄色,较大颗粒上呈红色。在保留胶体的存在下,通常会产生黄色沉淀(

③ 样品中含有其他醛类、酮类等还原性强的成分,或添加抗氧化剂等;葡萄糖等呈阳性反应(

  (2) α 萘酚试验(莫利希紫环反应):取试样水溶液1ml,加5%萘酚试液数滴,摇匀,滴5-6滴浓硫酸酸沿着管壁形成两层液体。2-3分钟后,两层液体表面出现紫红色环(糖、多糖或糖苷)(

多糖在浓硫酸存在下水解成单糖,单糖经浓硫酸脱水形成糠醛化合物α 萘酚与酚醛反应形成紫红色缩合物(

[注]糖苷的分子结构中含有糖基,一般属于单糖,如葡萄糖、鼠李糖、半乳糖,但也含有双分子糖(双糖)或多糖(多糖)。在上述反应条件下,糖苷a再水解成单糖,所以糖苷萘酚试验是分子中的糖部分(

2的反应,由于这种反应的敏感性,上述反应可以在有微量滤纸纤维或中草药粉存在的溶液中产生。多糖的确认试验:取样品水溶液5ml,蒸干,加蒸馏水1ml,再加乙醇5ml。如有沉淀,过滤收集,用少量热乙醇洗涤,然后将沉淀溶解于3ml蒸馏水中,进行以下试验(

碘试验:取样品非溶液1ml,加碘试液1滴,观察颜色变化,如为蓝黑色,则为苔藓糖;紫黑色是糊精;蓝色在加热时消失,在冷却时重新出现为淀粉(

② 多糖水解:取样品水溶液1ml,加稀盐酸5滴,在沸水浴中加热10-15分钟,用10%氢氧化钠溶液中和至中性,加新制备的碱性酒石酸铜4滴,再取供试品溶液1ml,不经酸水解直接加入上述供试品溶液4滴,两管在水浴中煮沸5-6分钟。如果水解后棕红色物质的量大于不水解时的量分解,说明有多糖(

多糖被水解生成单糖,铜离子被单糖的还原性(

还原为氧化亚铜4.单宁和酚

(1)氯化铁试验:取样品水溶液1ml,加入1-2滴三氯化铁试液,呈绿色、污绿色、蓝黑色或深紫色(水解鞣质呈蓝黑色,缩合鞣质呈绿色、污绿色)(

鞣质为多羟基酚的衍生物,它能与铁离子反应形成复合盐(

[注]在这个反应中,矿物酸、有机酸和醋酸盐的存在会阻碍颜色的形成。硝基酚没有obv与三氯化铁反应(

(2)明胶试验:取样品水溶液1ml,加氯化钠溶液2-3滴,形成白色沉淀物(

鞣质具有凝固蛋白性质(

(3)溴试验:取样品水溶液1ml,加氯化钠溶液1-2滴溴试液形成白色或沉淀物,说明其中可能含有苯酚或邻苯二酚单宁(

【注】过多的溴会阻碍单宁的沉淀,所以不应加入溴水(

(4)香草醛酸试液:将样品的水溶液放在滤纸上,晾干,用香兰素和盐酸溶液喷洒或滴注,显示红色斑点(多酚)

(5)薄层色谱法测定鞣质和酚类物质的反应:

吸附剂:聚酰胺;硅胶;硅胶;石膏:水(5:1:7)调形,涂于薄板上,1050干燥45分钟(

2.展开剂:乙醇:乙酸(100:2);正丁醇:乙酸乙酯:水(5:4:1);苯:甲醇(95:5)(

③ 显影剂:10%三氯化铁溶液;1%三氯化铁乙醇溶液和1%铁氰化钾水溶液(1:1)呈蓝紫色斑点(

5.类黄酮及其苷

(1)盐酸镁(或锌)粉试验:取样品乙醇溶液1ml,加少量镁(或锌),然后加入4-5滴浓盐酸,在沸水中加热热水浴2-3分钟。如果出现红色,则表示游离类黄酮或黄酮苷(不含镁或锌粉的方法与对照相同),如果两个试管都是红色,则表示存在花青素。如果继续加入碳酸试液使其变成碱,则会变成紫色,再加倍变成蓝色,证明其含有花青素(在盐酸存在下,

类黄酮的乙醇溶液可被镁粉还原形成花青素,并呈红色或紫色(有些呈淡黄色、橙色、紫色或蓝色)。原因是酮中含有一个碱性氧原子,能溶解在稀酸中,还原成四价氧原子,即锌盐。这个m方法是鉴定黄酮类化合物的一种反应。但花青素本身在酸性条件下呈红色(不添加镁粉),应加以区分(

[注]① 在化学结构上,羟基位于第三位的酮醇颜色较明显,而其它黄酮烷酮颜色不明显。因此,如果测试是阴性的,我们就不能得出否定的结论,我们需要结合其他实验得出结论(

② 试验应在酒精中进行,水分过多会影响颜色的形成。此反应缓慢,有时需要在水浴中加热以促进反应(

(2)荧光试验:

:三氯化铝ide试验:取供试品乙醇溶液于滤纸上(再干燥1次使其浓缩),干燥后,喷1%氯化铝乙醇溶液,在紫外光下观察,呈黄色、绿色、橙色等荧光类黄酮。天蓝色或黄绿色;荧光为二氢黄酮。这是鉴别二氢黄酮(

的鉴别反应② 硼酸-丙酮-柠檬酸-丙酮试验:取样品乙醇溶液1ml,在沸水浴上蒸干,加入饱和硼酸-丙酮溶液0.5ml和10%柠檬酸-丙酮溶液0.5ml,蒸干,丙酮处理后,试管呈强绿色荧光(黄酮类或其衍生物)(乙糖苷)在紫外光下(

(3)碱液试验:取样品的乙醇溶液,点在滤纸上(干燥后再点,使溶液浓缩)。干燥后,喷洒1%碳酸钠溶液或在氨气中熏蒸几分钟,使其呈现亮黄色、绿色或橙黄色。如果用氨气熏蒸过的滤纸暴露在空气中,颜色会逐渐消失,变成原来的颜色(类黄酮或其苷)(

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